دوره 13، شماره 1 - ( 1400 )                   جلد 13 شماره 1 صفحات 84-65 | برگشت به فهرست نسخه ها

‎ 20.1001.1.23222115.1400.13.1.5.4

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
aghaei jeshvaghani Z, Hosseini R. Isolation, Molecular Cloning, Expression and Bioinformatics Evaluation of aprX Serine Protease Gene Extracted from Bacillus licheniformis. JMBS 2022; 13 (1) :65-84
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-51399-fa.html
آقایی جشوقانی زهرا، حسینی رامین. همسانه‌سازی، بیان و بررسی بیوانفورماتیکی ژن سرین پروتئاز aprX استخراج شده از باکتری Bacillus licheniformis. زیست‌فناوری مدرس. 1400; 13 (1) :65-84

URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-51399-fa.html

همسانه‌سازی، بیان و بررسی بیوانفورماتیکی ژن سرین پروتئاز aprX استخراج شده از باکتری Bacillus licheniformis
زهرا آقایی جشوقانی1 ، رامین حسینی* 2
1- دانشجوی دکتری گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره)، قزوین، ایران
2- دانشیار گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره)، قزوین، ایران، قزوین، دانشگاه بین المللی امام خمینی قزوین، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی گروه بیوتکنولوژی کشاورزی ، r.hosseini@eng.ikiu.ac.ir
چکیده:   (1512 مشاهده)
هدف: پروتئازها از مهم­ترین آنزیم­های صنعتی محسوب می­شوند. معمولاً برای تولید این آنزیم­ها از باکتری­های جنس باسیلوس استفاده می­شود. هدف از این پژوهش همسانه­سازی، تعیین توالی، بیان و بررسی بیوانفورماتیکی ژن سرین پروتئاز aprX استخراج شده از باکتری باسیلوس لیکنی­فورمیس بود.
مواد و روش­ها: پس از استخراج DNA باکتریایی، ژن سرین پروتئاز با نام aprX از باکتری Bacillus licheniformis جداسازی و در ناقل pTG19-T  و سپس ناقل pET28a(+) همسانه­سازی شد و ساختار مولکولی، ویژگی­های بیوشیمیایی و فیلوژنتیکی آن مورد بررسی قرار گرفت و ساختار سه بعدی آنزیم همسانه­سازی شده پیش­بینی شد. جهت القای بیان ژن نوترکیب سرین پروتئاز از القاگر IPTG استفاده گردید و بیان پروتئین در غلظت­های مختلف IPTG، دماهای مختلف و زمان­های گوناگون مورد بررسی قرار گفت. تأیید بیان ژن aprX توسط آنالیز SDS-PAGE و دات بلاتینگ انجام شد. در ادامه نیز فعالیت آنزیم پروتئاز نوترکیب در دما و pH های گوناگون مورد سنجش قرار گفت.
یافته­ها: درستی همسانه­سازی به وسیله توالی­یابی تأیید شد. بر اساس نتایج حاصل از بررسی­های فیلوژنتیکی، توالی پروتئینی به دست آمده شباهت زیادی را با توالی­های سایر باسیلوس­ها نشان داد. پس از ارزیابی مدل­ها مشخص گردید که مدل­های ارائه شده توسط نرم­افزارهای RAPTORX و I-TASSER مدل­های مطلوبی برای پیش­بینی ساختار سه بعدی این پروتئاز هستند. تولید پروتئین نوترکیب با القاء IPTG به میزبان حاوی پلاسمید pET28a-aprX با موفقیت انجام شد. بیشترین مقادیر بیان پروتئین نوترکیب در دمای 25 درجه و طی زمان 20 ساعت و با IPTG 5/0 میلی­مولار به‏دست آمد.
واژه‌های کلیدی: بهینه سازی بیان، بیان پروتئین نوترکیب، توالی یابی، دات بلاتینگ، مدل‌سازی پروتئین، همسانه‌سازی مولکولی
متن کامل [PDF 662 kb]   (770 دریافت)    
نوع مقاله: پژوهشی اصیل | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی مولکولی
دریافت: 1400/1/16 | پذیرش: 1400/7/4 | انتشار: 1401/10/14
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.