دانشگاه تربیت مدرس زیست فناوری 2322-2115 6 1 2015 03 21 Isolation and biochemical characterization of detergent stable protease from Bacillus pumilus جداسازی و تعیین خصوصیت بیوشیمیایی پروتئاز مقاوم به شوینده از سویه باسیلویس پومیلوس 50 60 22321 FA ارسطو بدویی دلفارد هیات علمی بخش زیست شناسی دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران زهرا کرمی هیات علمی بخش زیست شناسی دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران باقر سیدعلیپور هیات علمی بخش زیست شناسی، دانشگاه مازندران، مازندران، ایران Journal Article In this study, a Bacillus species was identified from the Dosarri mineral spring in Jiroft microflora. This strain produce clear halo in casein agar media. It has been identified as Bacillus Pumilus (KHB3) based on biochemical tests and 16S rRNA gene sequencing. To enzyme production, this strain was cultured in specific medium for 48 h. Supernatant was partially purified after precipitation with ammonium sulphate (85 %), dialysis and ion exchange chromatography (Q-Sepharose). KHB3 protease was characterized in the presence of different pHs, ions and detergents. Results indicated that the enzyme showed maximum activity and stability in pH 8.0. This enzyme retained about 100 % of its activity in the presence of 1.0 and 1.5 M NaCl. KHB3 protease showed 33 and 10 % increase in protease activity in the presence of MnSO4 and FeSO4. KHB3 protease retained at least 45 % of its activity and stability in the presence of commercial detergents. In addition, it show 12 % increase in enzyme activity in the presence of Banoo detergent. Activity and stability in alkaline pH, organic solvents and detergent compounds show that this protease has high value capacity in detergent industry. در این پژوهش از فلور میکروبی چشمه آب معدنی دوساری واقع در شهرستان جیرفت، یک سویه باسیلوس شناسایی شد که در محیط اختصاصی کازئین آگار واجد فعالیت پروتئازی بود. این باکتری بر اساس تست‌های میکروبی- بیوشیمیایی و توالی‌یابی ژن 16S rRNA به عنوان B. Pumilus (KHB3) شناخته شد. به منظور تولید آنزیم، سویه موردنظر به مدت 48 ساعت در محیط مایع اختصاصی رشد داده شد. محیط کشت پس از رسوب دهی با سولفات آمونیوم (85 درصد) و دیالیز با ستون کروماتوگرافی تبادل یونیQ -سفاروز به طور نسبی خالص-سازی شد. ویژگی‌های بیوشیمیایی پروتئاز KHB3 در دماهای مختلف، pH‌های مختلف، یون‌ها و شوینده‌ها مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان دادند که آنزیم حداکثر فعالیت و پایداری را در 0/8 ‌pH نشان می‌دهد. این پروتئاز در حضور غلظت های 0/1 و 5/1 مولار NaCl حدود 100 درصد فعالیت خود را حفظ کرده است. در حضور یون‌های MnSO4 و FeSO4 به ترتیب 33 و 10 درصد افزایش فعالیت نسبت به عدم حضور یون را نشان می‌دهد. این پروتئاز حداقل 45 درصد فعالیت و پایداری خود را در حضور شوینده‌های تجاری حفظ کرده است. علاوه بر این، در حضور شوینده بانو حدود 12 درصد افزایش در فعالیت پروتئازی نشان می‌دهد. فعالیت و پایداری در pH‌های قلیایی، حلال‌های آلی و شوینده‌ها پتانسیل قابل توجه این آنزیم را برای استفاده در صنایع مختلف از جمله صنعت شوینده نشان می‌دهد. https://biot.modares.ac.ir/article_22321_e0908a66106a8ecc4d2eda89df820a98.pdf