دانشگاه تربیت مدرس زیست فناوری 2322-2115 8 2 2017 09 23 Optimization of the effective factors in E.coli growth producing recombinant β-NGF using response surface methodology بهینهسازی فاکتورهای مؤثر در رشد باکتری Escherichia coli تولیدکننده پروتئین نوترکیب βNGF با استفاده از روش سطح پاسخ 53 63 22365 FA پوریا غلامی تیلکو دانشجوی کارشناسی ارشد از بخش زیست فناوری میکروبی دانشگاه تهران زهرا حاجی حسن هیات علمی دانشگاه تهران نوید نظری دانشجوی کارشناسی ارشد دانشکده علوم و فنون نوین دانشگاه تهران حمید مقیمی استادیار بخش زیست فناوری میکروبی دانشگاه تهران Journal Article 1970 01 01 Production of recombinant proteins in Escherichia coli has been very common in recent decades. Many studies and experiments have been done in order to optimize the production and expression of recombinant proteins in E.coli. One strategy is using high cell density to increase recombinant protein production such as β-NGF in the cell. Therefore, in this study for the first time bacterial cell culture in high cell density was done using glycerol and yeast extract as carbon and nitrogen sources and MgCl2 as a growth effective factor. Also the effects of overnight culture conditions on bacterial growth were evaluated. Meanwhile culture conditions were optimized using response surface methodology (RSM) and the optimum conditions were as follows: 18/23 g/lit glycerol, 14.44 g/lit yeast extract and 10mM MgCl2. Also the obtained results indicated that the 14 hours incubation at 37 °C and 180 rpm were optimum conditions for the overnight culture. Our results showed that the rate of cell growth and recombinant β-NGF production in optimized condition is significantly higher than in basic medium. تولید پروتئینهای نوترکیب در میزبان باکتریایی ای کلای در چند دهه اخیر بسیار رواج پیداکرده است. مطالعات و آزمایشهای بسیار زیادی در زمینه بهینه سازی و افزایش تولید و بیان پروتئینهای نوترکیب در این میزبان انجام گرفته است. از راههای افزایش تولید، رسیدن به تراکم بالای سلولی (افزایش غلظت سلولی) و به طبع آن تولید بیشتر پروتئینهای داخل سلولی ازجمله پروتئین نوترکیب –NGF βمیباشد. بدین منظور در این پژوهش برای اولین بار با استفاده از گلیسرول و عصاره مخمر به عنوان منابع کربن و نیتروژن و همچنین نمک MgCl2 به عنوان افزایش دهنده رشد، کشت باکتری در تراکم سلولی بالا انجام شد. همچنین تأثیر شرایط کشت شبانه بر رشد باکتری مورد بررسی قرار گرفت. بهینه شرایط با استفاده از روش سطح پاسخ به دست آمد که شامل غلظت 18/23 گرم بر لیتر گلیسرول، غلظت 14/44 گرم بر لیتر عصاره مخمر و غلظت mM 10 نمک MgCl2 میباشد. همچنین کشت 14 ساعته در دمای 37 درجه سانتی گراد و دور شیکرrpm 180 به عنوان شرایط بهینه رشد معرفی شد. ایﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﻧﺸﺎن داد ﮐﻪ میزان رشد سلولی و ﺗﻮﻟﯿﺪ پروتئین نوترکیب –NGF β در ﺷﺮایﻂ بهینه شده ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﭘﺎیﻪ اﻓﺰایﺶ قابل توجهی داﺷﺘﻪ اﺳﺖ. https://biot.modares.ac.ir/article_22365_3d20badc2e5a7bf74ce0fc12cabfbd92.pdf