Rabbani F, jafarian V, asoodeh A. Isolating, purifying and determining of biochemical properties of catechol 1, 2 dioxygenase from microbial flora in petroleum-contaminated soils. JMBS 2020; 11 (2) :217-224
URL:
http://biot.modares.ac.ir/article-22-32865-fa.html
1- دانشجوی سابق کارشناسی ارشد، گروه زیستشناسی، دانشکده علوم، دانشگاه زنجان،
2- دانشیار گروه زیستشناسی، دانشکده علوم، دانشگاه زنجان، زنجان، بلوار دانشگاه، دانشگاه زنجان کدپستی: 38791-45371 ، v.jafarian@znu.ac.ir
3- استاد گروه شیمی، دانشکده علوم، دانشگاه فردوسی مشهد،
چکیده: (2953 مشاهده)
پژوهش حاضر با هدف خالصسازی و شناسایی بیوشیمیایی آنزیم تجزیهکننده فنول از باکتریهای موجود در خاکهای حاوی آلایندههای نفتی انجام پذیرفت. پروتئین کاتکول 1و 2 دی اکسیژناز از باکتریAneurinibacillus migulanus Isolate ZNU05 استخراج و با استفاده از ستون کروماتوگرافی تبادل یونی Q-Sepharoseتخلیص شد. فعالیت آنزیم در pHهای مختلف بین 4 تا 9، محدوده دمایی20 تا 70 درجه سلسیوس، و در حضور نمک کلرید یونهای فلزی مختلفی مانند 2+ Ca، K+، Mn2+،Co2+ ،Zn 2+،Mg2+ ،Cu2+، + Na و حلالهای گوناگون شامل اتانول، اتیلاستات، پترولیوماتر، استونیتریل، ان-آمیلالکل، ان-هگزان و تولوئن ارزیابی شد. همچنین فعالیت این آنزیم با استفاده از سوبستراهای گوناگون مانند فنول، کتکول، بنزوئیک اسید، پیروگالول و آلفا ـ نفتول بررسی گردید. آنالیز پروتئین به روش SDS-PAGE بیانگر وجود تک باند پروتئینی با وزن مولکولی حدود 40 کیلودالتون بود. نتایج تعیین ویژگی آنزیم کتکول 1و2 دی اکسیژناز نشان داد که pH و دمای مطلوب به ترتیب 5/8 و 30 درجه سلسیوس بود. فعالیت کاتالیتیکی آنزیم در حضور یونهای کلرید کبالت و روی (5 میلیمولار) و همچنین حلال آلی آمیل الکل، افزایش یافت، ولی دیگر یونهای فلزی و حلالهای آلی بکار رفته باعث کاهش و یا مهار فعالیت آنزیم شدند. از میان سوبستراهای مختلف بر روی فعالیت آنزیم، کتکول سوبسترای بسیار مطلوبتری برای آنزیم بود، به طوری کهVmax و Km آنزیم برای این سوبسترا به ترتیب 959/8 واحد بر میلیگرم و 992/4 میکرومول بر میلیلیتر میباشد.
نوع مقاله:
پژوهشی اصیل |
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی میکروبی دریافت: 1398/2/21 | پذیرش: 1399/1/26 | انتشار: 1399/3/17