جستجو در:
دوره 15، شماره 1 - ( 1402 )
جلد 15 شماره 1 صفحات 49-33 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Fathollahi Y, Dabirmanesh B, Khajeh K, Khodakarami A. Cloning, Expression of Anti-PDL1/ Anti-CTLA-4 diabody Using Bacterial PelB Leader Sequence in E.coli BL21 strain. JMBS 2023; 15 (1) :33-49
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-70493-fa.html
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-70493-fa.html
fathollahi یعقوب، دبیر منش بهاره، خواجه خسرو، خداکرمی عاطفه. کلونینگ، بیان و تخلیص دیابادی Anti-PDL-1 – Anti- CTLA-4 در میزبان E.coli با استفاده از تگ pelB. زیست‌فناوری مدرس. 1402; 15 (1) :33-49
یعقوب fathollahi1 
، بهاره دبیر منش* 
2، خسرو خواجه1 ، عاطفه خداکرمی3
، بهاره دبیر منش* 2، خسرو خواجه1 ، عاطفه خداکرمی3
1- عضو هیت علمی،
2- عضو هیت علمی ،dabirmanesh@modares.ac.ir
3- دانشجوی دانشگاه،
2- عضو هیت علمی ،
3- دانشجوی دانشگاه،
چکیده: (960 مشاهده)
نقاط بازرسی ایمنی، مولکول هایی هستند که سیستم ایمنی را تنظیم می‌کنند. برخی از سلول های تومور می توانند لیگاندهای متصل شونده به این نقاط بازرسی ایمنی را برای فرار از پاسخ های ایمنی ضد توموری بیان کنند. برخی از عوامل، مانند آنتی بادی ها، می توانند این نقاط بازرسی را مهار کنند. هدف از این مطالعه بیان یک دیابادی دو منظوره جدید در فضای پری پلاسمیک باکتری E. coli BL21(DE3) برای مهار همزمان دو نقطه بازرسی ایمنی، پروتئین مرتبط با ۴ (CTLA 4) و لیگاند متصل شونده (PD L1) است.
دیابادی دو منظوره بر اساس ژن نواحی متغیر آنتی‌بادی‌های anti PD-L1 و anti CTLA 4 طراحی و جهت بیان درباکتری E. coli BL21(DE3) بهینه سازی و در پلاسمید بیانی pET21 کلون شد. پس از ترنسفرم کردن به داخل سویه بیانی E. coli BL21(DE3) اثر شرایط بیانی مختلف کشت مورد بررسی قرار گرفت، بیانDia-21 با وزن مولکولی ۵۵کیلو دالتون با الکتروفورز ژل SDS-PAGE و وسترن بلات تأیید شد. بهترین شرایط برای بیان پری پلاسمیک به فرم محلول بیان با 0/5 میلی مولار IPTG در دمای 23 درجه سانتی گراد محیط کشتLB و زمان ۱۸ ساعت به دست آمد. پروتئین بیان شده سپس با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز با بازده نهایی 0/4 میلی گرم در لیتر تخلیص و نهایت میل ترکیبی برهمکنش پروتئین خالص شده توسط Cell-ELISA بررسی شد.
پروتئین دیابادی نوترکیب در یک سیستم باکتریایی بیان و خالص‌سازی و برهمکنش پروتئین دیابادی نوترکیب باگیرنده سطح سلولی PDL-1 از طریق Cell-Elisa بررسی شد.
دیابادی دو منظوره بر اساس ژن نواحی متغیر آنتی‌بادی‌های anti PD-L1 و anti CTLA 4 طراحی و جهت بیان درباکتری E. coli BL21(DE3) بهینه سازی و در پلاسمید بیانی pET21 کلون شد. پس از ترنسفرم کردن به داخل سویه بیانی E. coli BL21(DE3) اثر شرایط بیانی مختلف کشت مورد بررسی قرار گرفت، بیانDia-21 با وزن مولکولی ۵۵کیلو دالتون با الکتروفورز ژل SDS-PAGE و وسترن بلات تأیید شد. بهترین شرایط برای بیان پری پلاسمیک به فرم محلول بیان با 0/5 میلی مولار IPTG در دمای 23 درجه سانتی گراد محیط کشتLB و زمان ۱۸ ساعت به دست آمد. پروتئین بیان شده سپس با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز با بازده نهایی 0/4 میلی گرم در لیتر تخلیص و نهایت میل ترکیبی برهمکنش پروتئین خالص شده توسط Cell-ELISA بررسی شد.
پروتئین دیابادی نوترکیب در یک سیستم باکتریایی بیان و خالص‌سازی و برهمکنش پروتئین دیابادی نوترکیب باگیرنده سطح سلولی PDL-1 از طریق Cell-Elisa بررسی شد.
نوع مقاله: پژوهشی اصیل |
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی مولکولی
دریافت: 1402/4/22 | پذیرش: 1403/1/6 | انتشار: 1403/4/4
دریافت: 1402/4/22 | پذیرش: 1403/1/6 | انتشار: 1403/4/4
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |