همسانه‌سازی ژن LysA در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه L- لیزین

چراغی, سارا; اکبرزاده, عظیم; حاجی حسینی, رضا; انصاری هادیپور, هادی; حمزه ای تاج, سمیه; خادمی مزده, سمانه; مهرابی, محمدرضا; فرهنگی, علی; صفاری, زهرا; قاسمی, سهیل

همسانه‌سازی ژن LysA در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه L- لیزین

نویسندگان

سارا چراغی ¹

عظیم اکبرزاده ²

رضا حاجی حسینی ³

هادی انصاری هادیپور ⁴

سمیه حمزه ای تاج ²

سمانه خادمی مزده ²

محمدرضا مهرابی ²

علی فرهنگی ²

زهرا صفاری ²

سهیل قاسمی ⁵

¹ انستیتو پاستور

² انستیتوپاستور ایران

³ دانشگاه پیام نور

⁴ دانشگاه اراک

⁵ انستیوپاستور ایران

چکیده

L – لیزین یکی از اسیدهای‌آمینه ضروری است که در تغذیه انسان و دام اهمیت بسزایی دارد. این اسیدآمینه به دلیل کاربرد بسیار در صنایع دارویی و غذایی حائز اهمیت می‌باشد. تولید صنعتی لیزین از نظر اقتصادی بسیار مهم است. سالانه چندین هزار تن لیزین در جهان بوسیله Corynebacterium glutamicum تولید می‌شود.
روش بررسی: پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی با دو توالی برشی برای آنزیم‌های NheI و HindIII، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و جهت تعیین ترادف و هضم آنزیمی مناسب در وکتور pTZ57R/T کلون گردید. پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در وکتور بیانی pET28a کلون و در سویه E.coli BL21(DE3) ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب با روش‌های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد.
یافته‌ها: ژن LysA به طول kb 3/1 با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ژن LysA به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. همسانه سازی با استفاده از SDS-PAGE تایید شد.
بحث: در این مطالعه برای اولین بار بیان ژن آنزیم دی‌آمینوپیمیلات‌دکربوکسیلاز (4.1.1.20 EC) همسانه گردید و وکتور بیانی بررسی شد.

کلیدواژه‌ها

دی آمینوپیمیلات دکربوکسیلاز"

کورینه باکتریوم گلوتامیکوم"

- "

pET28a"

pTZ57R/T "