تخلیص پرتوسیس توکسین از سویه واکسینال 509 سیاه سرفه و زیست سنجی آن بر اساس آزمایش CHO-Cell

گودرزی, حمید رضا; نظری شیروان, علی; نوفلی, مجتبی; رضایی مکرم, علی; سعادتی, مجتبی

تخلیص پرتوسیس توکسین از سویه واکسینال 509 سیاه سرفه و زیست سنجی آن بر اساس آزمایش CHO-Cell

نویسندگان

حمید رضا گودرزی ¹

علی نظری شیروان ²

مجتبی نوفلی ³

علی رضایی مکرم ⁴

مجتبی سعادتی ⁵

¹ آزمایشگاه مرکزی -موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی - سازمان تحقیقات،ترویج و آموزش کشاورزی- تهران - ایران

² بخش پروتئومیکس- بیوشیمی، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی- سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی- تهران- ایران

³ بخش تحقیق و تولید واکسنهای باکتریایی انسانی- موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی- سازمان تحقیقات ، ترویج و آموزش کشاورزی- تهران- ایران

⁴ معاونت تضمین کیفیت- موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی- سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی- تهران- ایران

⁵ استاد گروه زیست شناسی مرکز تحقیقات زیست شناسی- دانشگاه جامع امام حسین (ع)- تهران- ایران

چکیده

پرتوسیس توکسین مهمترین عامل ویرولانس باکتری Bordetella pertussis است که از نوع اگزوتوکسین های پروتئینی AB5 می باشد و آنتی ژن محوری درساخت واکسن های غیر سلولی سیاه سرفه است. به دلیل ملاحظات اقتصادی روشهای تخلیص پرتوسیس توکسین بطور کامل منتشر نشده است. هدف از این تحقیق، راه اندازی و اصلاح روش تخلیص پرتوسیس توکسین از مایع رویی کشت باکتری و زیست سنجی آن توسط آزمون CHO-cell بود. سویه واکسینال ۵۰۹ B. pertussis و سلول CHO از موسسه رازی تهیه گردید. کشت باکتری در فرمانتور 300 لیتری در دمای 35 درجه سانتیگراد و در محیط B2 به مدت 44 ساعت صورت پذیرفت. سپس مایع رویی جدا سازی گردیده و به ترتیب با فیلتر 45/0 میکرومتر تصفیه گردید و سپس با دستگاه اولترافیلتراسیون (cut off 10 kDa) تغلیظ شد. تخلیص توکسین توسط کروماتوگرافی میل ترکیبی با فتوئین سفاروز انجام گردید. پس از اعمال توکسین تخلیص شده بر منولایر سلولی CHO، فرایند خوشه ای شدن سلول ها از ساعت نخست پدیدار گردید و در مشاهدات ساعت دوازدهم به بعد متوقف شد. میزان توکسین تخلیص شده IU/ml 43/0 ±۵۳/۲ محاسبه گردید. طی تولید واکسن های سلولی، پس از جدا سازی جرم سلولی، فاز مایع دور ریخته می شود، حال آنکه نتایج بررسی حاضر نشان داد این فاز محتوی مقادیر قابل توجه توکسین می باشد. با توجه به آنکه استحصال پرتوسیس توکسین، رکن اصلی در توسعه و ساخت واکسن های نوین غیر سلولی است لذا تحقیقات تکمیلی در خصوص استفاده از سایر سویه ها و بررسی شرایط مختلف کشت باکتری پیشنهاد می شود.

کلیدواژه‌ها

سیاه سرفه

بوردتلا پرتوسیس

پرتوسیس توکسین

کروماتوگرافی میل ترکیبی