جستجو در:
دوره 9، شماره 3 - ( 1397 )
جلد 9 شماره 3 صفحات 425-417 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Solgi Z, Khalifeh K, Hosseinkhani S, Ranjbar B. Comparison of Thermodynamic Stability and Kinetic Refolding of Lampyris turkestanicus and Some of Its Mutants. JMBS 2018; 9 (3) :417-425
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-24434-fa.html
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-24434-fa.html
سلگی زهرا، خلیفه خسرو، حسین‌خانی سامان، رنجبر بیژن. مقایسه پایداری ترمودینامیک و بازتاخوردگی سینتیک آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی و برخی جهش‌یافته‌های آن. زیست‌فناوری مدرس. 1397; 9 (3) :417-425
زهرا سلگی1 
، خسرو خلیفه2 ، سامان حسین‌خانی3 ، بیژن رنجبر* 4
، خسرو خلیفه2 ، سامان حسین‌خانی3 ، بیژن رنجبر* 4
1- گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران،
2- گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران،
3- گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران،
4- گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، تهران، بزرگراه جلال آل احمد، پل نصر، دانشگاه تربیت مدرس ،ranjbarb@modares.ac.ir
2- گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران،
3- گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران،
4- گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، تهران، بزرگراه جلال آل احمد، پل نصر، دانشگاه تربیت مدرس ،
چکیده: (6512 مشاهده)
اهداف: احتمال برقراری میان‌کنش‌های الکتروستاتیک به‌علت فراوانی رزیدوهای باردار آب‌دوست به‌ویژه آرژنین به‌عنوان مهم‌ترین فاکتور پایدارکننده دمایی آنزیم‌های گرمادوست مطرح شده است. هدف این مطالعه، مقایسه پایداری ترمودینامیک و بازتاخوردگی سینتیک آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی و برخی جهش‌یافته‌های آن بود.
مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربی حاضر، پایداری گرمایی و نحوه بازتاخوردگی آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی لامفیریس ترکستانیکوس و ۳ جهش‌یافته ERR, ERR/I۲۳۲R, ERR/Q۳۵R/I۱۸۲R/I۲۳۲R توسط تکنیک‌های مختلف اسپکتروسکوپی بررسی شد. به‌منظور بیان بالای پروتئین‌ها یک تک‌‌کلونی از هر یک از نمونه‌ها انتخاب و به ۱۰میلی‌لیتر محیط کشت LB دارای کانامایسین با غلظت ۵۰میکروگرم بر میلی‌گرم تلقیح و در دمای C°۳۷ و با هوادهی مطلوب به‌مدت ۱۵-۱۲ ساعت انکوبه شد. به‌منظور تهیه محتوای سلولی از باکتری‌ها، محیط کشت القاشده به‌مدت ۵ دقیقه در ۵۰۰۰گرم و دمای C°۴ سانتریفوژ شد. نتایج از طریق مطالعات با روش‌های طیف‌سنجی دورنگ‌نمایی دورانی در ناحیه دور، نزدیک و فلورسانس ذاتی، مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی (DSC) و آزمایش‌های سینتیکی با استفاده از تکنیک جریان متوقف مبتنی بر فلوئورسانس به دست آمد.
یافته‌ها: همراه با افزایش تعداد رزیدوی آرژنین در سطح پروتئین، پایداری و فشردگی ساختاری آنزیم‌های جهش‌یافته در مقایسه با آنزیم وحشی افزایش یافته و ترموگرام‌های حاصل از مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی نیز بیانگر افزایش اندکی در Tm و آنتالپی کالریمتری پروتئین‌های جهش یافته نسبت به پروتئین وحشی بودند.
نتیجه‌گیری: ثابت سرعت بازتاخوردگی آنزیم‌های جهش‌یافته نسبت به نوع وحشی افزایش پیدا کرده است. بهبود پارامترهای ترمودینامیک و سینتیک ناشی از بهبود میان‌کنش‌های الکترواستاتیک است که منجر به درجه بالاتری از فشردگی و تراکم ساختاری می‌شود.
مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربی حاضر، پایداری گرمایی و نحوه بازتاخوردگی آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی لامفیریس ترکستانیکوس و ۳ جهش‌یافته ERR, ERR/I۲۳۲R, ERR/Q۳۵R/I۱۸۲R/I۲۳۲R توسط تکنیک‌های مختلف اسپکتروسکوپی بررسی شد. به‌منظور بیان بالای پروتئین‌ها یک تک‌‌کلونی از هر یک از نمونه‌ها انتخاب و به ۱۰میلی‌لیتر محیط کشت LB دارای کانامایسین با غلظت ۵۰میکروگرم بر میلی‌گرم تلقیح و در دمای C°۳۷ و با هوادهی مطلوب به‌مدت ۱۵-۱۲ ساعت انکوبه شد. به‌منظور تهیه محتوای سلولی از باکتری‌ها، محیط کشت القاشده به‌مدت ۵ دقیقه در ۵۰۰۰گرم و دمای C°۴ سانتریفوژ شد. نتایج از طریق مطالعات با روش‌های طیف‌سنجی دورنگ‌نمایی دورانی در ناحیه دور، نزدیک و فلورسانس ذاتی، مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی (DSC) و آزمایش‌های سینتیکی با استفاده از تکنیک جریان متوقف مبتنی بر فلوئورسانس به دست آمد.
یافته‌ها: همراه با افزایش تعداد رزیدوی آرژنین در سطح پروتئین، پایداری و فشردگی ساختاری آنزیم‌های جهش‌یافته در مقایسه با آنزیم وحشی افزایش یافته و ترموگرام‌های حاصل از مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی نیز بیانگر افزایش اندکی در Tm و آنتالپی کالریمتری پروتئین‌های جهش یافته نسبت به پروتئین وحشی بودند.
نتیجه‌گیری: ثابت سرعت بازتاخوردگی آنزیم‌های جهش‌یافته نسبت به نوع وحشی افزایش پیدا کرده است. بهبود پارامترهای ترمودینامیک و سینتیک ناشی از بهبود میان‌کنش‌های الکترواستاتیک است که منجر به درجه بالاتری از فشردگی و تراکم ساختاری می‌شود.
واژه‌های کلیدی: لوسیفراز، کالریمتری روبشی تفاضلی، دورنگ‌نمایی دورانی، فلورسانس جریان متوقف، ترمودینامیک، سینتیک
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی کشاورزی
دریافت: 1395/8/2 | پذیرش: 1396/7/5 | انتشار: 1397/6/31
دریافت: 1395/8/2 | پذیرش: 1396/7/5 | انتشار: 1397/6/31
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |