۱۳ نتیجه برای نظریان
دوره ۲، شماره ۶ - ( تابستان ۱۴۰۰ )
چکیده
هدف از اجرای تحقیق حاضر مدلسازی معادلات ساختاری بازاریابی سبز و تمایل به خرید مشتریان محصولات ورزشی با میانجیگری مسئولیتپذیری اجتماعی فروشندگان ورزشی است. روش تحقیق توصیفی همبستگی است که بهصورت میدانی انجام شده است. برای این منظور ۳۸۴ نفر از مشتریان فروشگاههای ورزشی شهر تهران با استفاده از روش مونرو بهصورت تصادفی خوشهای بهعنوان نمونۀ آماری انتخاب شدند. برای گردآوری اطلاعات از پرسشنامههای آگاهی از بازاریابی سبز و تمایل به خرید حبیبی ساروی (۱۳۹۵) (۹۲/۰=α)، مسئولیتپذیری اجتماعی پارک و همکاران (۲۰۱۷) (۷۳/۰=α) با مقیاس ۵ ارزشی لیکرت استفاده شد. برای نرمال بودن دادههای تحقیق از آزمون کولموگروف ـ اسمیرنوف و برای آزمون فرضیههای تحقیق از روش مدلسازی معادلات ساختاری شامل تحلیل عاملی تأییدی و تحلیل مسیر با نرمافزار ایموس و نرمافزار آماری اس.پی.اس.اس. نسخۀ ۲۲ در سطح معنیداری ۰۵/۰≥P استفاده شد. نتایج استنباطی بهدستآمده نشان داد که بین بازاریابی سبز و تمایل به خرید مشتریان محصولات ورزشی با نقش میانجیگری مسئولیتپذیری اجتماعی فروشندگان رابطه وجود دارد. همچنین مدل ارتباطی بین سه متغیر از برازش کافی برخوردار است
فیروز ابراهیمی، علیرضا فراست، سید جعفر موسوی، سامان حسینخانی، عباس حاجی زاده، شهرام نظریان،
دوره ۳، شماره ۲ - ( ۹-۱۳۹۱ )
چکیده
نوروتوکسینهای بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته شدهاند که باعث ایجاد فلج عضلانی میشوند. خاصیت آنزیمی این توکسینها، مهار آزادسازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث میشود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ A با درصد خلوص بالا، بهمنظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجامشد. توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A از پایگاه ژنی NCBI گرفتهشد. پس از بهینهسازی کدون ترجیحی ژن مورد نظر برای E.coli، توالی نهایی ژن بهمنظور سنتز در وکتور بیانی pET۲۸a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان E.coli BL۲۱-DE۳ ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون Ni-NTA تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت ۵/۰ میلی مولار IPTG، با جذب نوری ۵/۰ و زمان القای ۱۸ ساعت در دمای ۱۸ درجه سانتی گراد بهدست آمد. آزمایشهای وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تأییدکردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوریکه پروتئین مورد نظر با درصد خلوص ۹۸ بهدست آمد.
دوره ۱۰، شماره ۰ - ( Spring ۲۰۰۸- ۱۳۸۶ )
چکیده
هدف: سالمونلا تیفیموریوم یکی از بیماریزاهای مهم غذایی است که باعث ایجاد گاستروانتریت میشود. در این تحقیق روش PCR-ELISA برای شناسایی سالمونلا تیفیموریوم به کار گرفته شده است.
مواد و روشها: ژن rfb، که مسئول بیوسنتز آنتیژن O از لیپوپلیساکارید باکتری است، به عنوان توالی هدف انتخاب گردید. آغازگرهای تعیین شده منجر به تکثیر قطعه ۸۸۲ جفت بازی برای گونه سالمونلا تیفیموریوم شد. نمونههای غذایی آلوده به باکتری سالمونلا تیفیموریوم و همچنین نمونههای بالینی و گونههای استاندارد مورد بررسی و آزمایش قرار گرفت. محصول PCR به طور تصادفی با دیگوکسیژنین نشاندار و به کف ظرفهای دارای استرپتواویدین منتقل و به روش الایزا و با استفاده از آنتیبادی ضد دیگوکسیژنین مورد بررسی قرار گرفت. از کاوشگر داخلی نشاندار با بیوتین نیز برای تأیید محصول PCR استفاده گردید.
نتایج: اختصاصی بودن روش با بررسی ۲۰ نمونه سالمونلا و ۶ نمونه غیر سالمونلا ارزیابی شد که فقط نتایج گونه تیفی موریوم مثبت و بقیه گونهها منفی بود. الایزا دقت و حساسیت روش PCR را تا حدود ۱۰۰۰ برابر افزایش داد.
نتیجهگیری: روش ارائه شده در این تحقیق با توجه به طولانی بودن روشهای مرسوم کشت، برای تأیید وجود باکتری در نمونههای بالینی و غذایی میتواند یک شیوه تشخیصی حساس و کارآمدی برای شناسایی و غربالگری سالمونلا تیفیموریوم باشد. روش حاضر در غربالگریهای وسیع با توجه به حساسیت بالا میتواند ضمن تشخیص اختصاصی تر، جایگزین خوبی برای PCR باشد.
دوره ۱۱، شماره ۰ - ( Spring & Summer ۲۰۰۸- ۱۳۸۷ )
چکیده
هدف: مننژیت باکتریایی یکی از عفونتهای جدی و گاهی کشنده است که روی سیستم اعصاب مرکزی تأثیر میگذارد. دانستن علت مننژیت ایجاد شده توسط عوامل ویروسی یا باکتریایی، بهدلیل تفاوت در شدت بیماری و نیز درمان آن از اهمیت خاصی برخوردار است زیرا آنتیبیوتیکها میتوانند مانع از گسترش بعضی از این عوامل در بین مردم شوند. نیسریا مننژیتیدس و هموفیلوس آنفولانزا دو عامل مهم بیماریزا هستند که در ایجاد مننژیت حاد باکتریایی دخالت دارند.
روشهای مختلفی برای شناسایی نیسریا مننژیتیدس و هموفیلوس آنفولانزا استفاده شده است، اما علاوه بر طولانی شدن نیاز به روشهای حساستری برای شناسایی این بیماریزاها میباشد؛ بنابراین زمان آزمایش از حساسیت کمتری برخوردار بوده و انجام آن با مشکلاتی همراه است.
مواد و روشها: در این تحقیق برای شناسایی هموفیلوس آنفولانزا و نیسریا مننژیتیدس از روش PCR Multiplex (mPCR) استفاده شد. تأیید اولیه این زیرگونهها به روش بیوشیمیایی صورت پذیرفت. بهمنظور شناسایی با استفاده از واکنش mPCR، دو جفت آغازگر اختصاصی ژن lic-۱ برای هموفیلوس آنفولانزا و ژن opa برای نیسریا مننژیتیدس طراحی شد.
نتایج: قطعه DNA تکثیر یافته برای هموفیلوس آنفولانزا ۱۵۰ جفتباز و برای نیسریا مننژیتیدس ۳۲۰ جفتباز بود. استرپتوکوکوس نمونیا بهعنوان کنترل منفی استفاده شد و نتایج PCR آن با آغازگر طراحی شده منفی بود.
نتیجهگیری: این مطالعه نشان داد که PCR خصوصاً زمانی که نتایج رنگآمیزی، کشت باکتری یا شناسایی آنتیژن منفی بوده یا نتوان بهطور قطعی نتایج آنها را تأیید نمود، یک تکنیک تکمیلی مفید برای تشخیص میباشد.
دوره ۱۱، شماره ۱ - ( بهار و تابستان ۱۳۸۶ )
چکیده
هدف این مقاله معرفی نظریه «شهرنشینی دیفرانسیل» و آزمایش این نظریه با مورد نمونه ایران در طول ۵۰ سال بین ۱۹۵۰ تا ۲۰۰۰ در ۱۰ دوره آماری می باشد. در این مقاله ابتدا نظریه شهرنشینی دیفرانسیل معرفی شده است و سپس به مطالعات موردی که این نظریه را به کار برده اند اشاره شده است. در نهایت این نظریه را برای بررسی نظام شهری ایران به کار گرفته ایم. آزمایش این نظریه در مورد ایران نشان می دهد که نظام شهری ایران این دوره «شهرنشینی» را از سال ۱۹۵۰ آغاز کرده و سه مرحله این دوره را به ترتیب تا سال ۱۹۷۵ گذرانده است. همینطور از سال ۱۹۷۵ تا ۱۹۹۵ دو مرحله مربوط به دوره «واگرایی قطبی» را طی کرده و به دوره «شهرگریزی» وارد می شود. نتایج به دست آمده از این تحقیق نشان می دهد که به طور کلی نظریه شهرنشینی دیفرانسیل با روند نظام شهری ایران تطابق دارد؛ اگر چه بعضی تفاوت ها را هم در نظام شهری ایران نشان می دهد.
حسین سمیعی ابیانه، شهرام نظریان، جعفر امانی، امیر سجاد حجتی رزجی، محمدرضا رمضانی، محمد رضا رحمانی،
دوره ۱۳، شماره ۲ - ( بهار ۱۴۰۱ )
چکیده
زمینه و هدف: سموم بوتولینوم (BoNTs) جزء کشندهترین ترکیباتی هستند که تاکنون شناختهشده و عامل بیماری بوتولیسم میباشند. در حال حاضر، تشخیصBoNT در غذا به استفاده از سنجش زیستی روی موش آزمایشگاهی است که یک روش بسیار حساس (محدوده تشخیص pg mL-۱ ۷ تا ۲۰) اما زمانبر میباشد. این روش سریع، اختصاصی و می تواند حساسیتی معادل آزمایش روی موش آزمایشگاهی دارد. هدف از این تحقیق استفاده از روش ساندویچ الایزا جهت شناساییBoNT/B بود.
مواد و روشها: پروتئین نوترکیب ۳۷۰ اسید آمینهای از انتهای کربوکسیل بخش اتصالدهنده سم BoNT/B با وزن مولکولی ۴۵ کیلودالتون به عنوان آنتیژن بیان و به روش کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA خالصسازی شد. آنتیبادی IgG از سرم موشی و خرگوشی با روش کروماتوگرافی تمایلی رزین پروتئین G جداسازی و به روش SDS-PAGE و آزمون الایزا ، تائیدشد. حساسیت و اختصاصیت روش طراحیشده جهت تشخیص آنتیژن نوترکیب BoNT/B-HcC و توکسوئید بوتولینوم تایپ B ارزیابی شد.
نتایج: غلظت آنتیبادی موشی و خرگوشی تخلیص شده به ترتیب ۳ و ۵/۴ میلیگرم از هر میلیلیتر سرم بود. حداقل غلظت پروتئین قابل شناسایی به روش الایزا غیر مستقیم با آنتی بادی تخلیص شده موشی و خرگوشی ۴۷۵ و ۱۱۸ پیکوگرم تعیین شد. با بهینه سازی روش ساندیچ الایزا حداقل۳۰ نانوگرم از آنتیژن نوترکیبBoNT/B-HcC و ۱۴۶ پیکوگرم ازBoNT/B با اختصاصیت بالا شناسایی شد.
نتیجهگیری: روش ساندویچ الایزای طراحی شده می تواند برای شناسایی دقیق و حساس سم کلستردیوم بوتولینوم تیپ B مورد استفاده قرار گیرد. لازم است در آینده کارآیی این روش برای تشخیص سم بوتولینوم در نمونههای محیطی و غذایی ارزیابی گردد.
دوره ۱۳، شماره ۴ - ( ۱۲-۱۳۸۹ )
چکیده
هدف: اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک بهعنوان مهمترین عامل اسهال و مرگ و میر در کودکان در کشورهای در حال توسعه شناخته شده است. این باکتری سالانه موجب مرگ ۳۰۰ تا ۵۰۰ هزار کودک زیر ۵ سال میشود. به دلیل درمان مشکل و شیوع زیاد آن، طراحی یک واکسن مؤثر علیه این ارگانیسم از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین CfaB بهعنوان زیرواحد اصلی فیمبریه، نقش مهمی در اتصال باکتری به سلولهای پوششی روده دارد و آنتیبادیهای تولید شده علیه این پروتئین میتواند از اتصال باکتری به سطح بافت پوششی جلوگیری کند. از این رو این مولکول به تنهایی یا با سایر عوامل حدتزا در طراحی واکسن علیه این ارگانیسم مورد توجه بسیاری از محققین است. در این مطالعه، بیان فاکتور کلونیزاسیون B با هدف مطالعه ایمونوژنیسیته این پروتئین بهعنوان جزئی از کاندیدای واکسن انجام شد.
مواد و روشها: ژن cfaB با روش PCR، تکثیر و در ناقل pET۲۸a همسانهسازی و بیان آن بررسی شد. با توجه به عدم بیان این ژن بهعلت وجود کدونهای نادر، ژن cfaB با استفاده از کدونهای متداول در
اشریشیا کولی بهینهسازی و مجدداً در ناقل pET۲۸a همسانهسازی و بیان شد.
نتایج: حضور باند ۲۰ کیلودالتونی در ژل SDS-PAGE، بیان پروتئین CfaB را نشان میداد که با روش ایمنو بلات با آنتیبادی anti-His tag و آنتیبادی ضد CfaB، تأیید و با ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شد.
نتیجهگیری: بهینهسازی کدون و بیان در میزبانهای هترولوگ یک روش مفید در تولید پروتئینهای نوترکیب به مقدار زیاد است.
سحر کریمی، شهرام نظریان، فتاح ستوده نژاد نعمت الهی، روح الله درستکار، جعفر امانی،
دوره ۱۴، شماره ۱ - ( زمستان ۱۴۰۱ )
چکیده
با توجه به همه گیری کووید۱۹ به عنوان یک بحران جهانی طراحی واکسن به منظور پیشگیری حایز اهمیت است. این ویروس جز خانواده بتا کرونا ویروس بوده و بر سطح غشای ویروس گلیکوپروتئین اسپایک ساختارهای زائده مانندی را تشکیل می دهد . مطالعات روی SARS-CoV-۱ و واکسنهای MERS-CoV مربوطه نشان داد که پروتئین اسپایک روی سطح ویروس یک هدف مناسب برای واکسن است. در این پژوهش تجربی، ما قطعات پروتیئن اسپایک نوترکیب recombinant fragment of spike protein (rfsp)را که در میزبان یوکاریوتی سلول CHO-K۱ و پروکاریوتی E. coli بیان شده است را از نظر قدرت ایمنی زایی, فعالیت خنثی سازی , توانایی شناسایی اپیتوپ های مشابه با سویه ویروس و توانایی اتصال به سرم بیماران بهبود یافته کووید ۱۹ از دو نوع واریانت آلفا و دلتا مقایسه کردیم. نتایج نشان داد که هر دو پروتئین rfSP یک کاندید آنتی ژن بالقوه جدید برای توسعه واکسن کووید۱۹ هستند. اما سلول CHO با انجام فرآیند تغییرات پس از ترجمه مانند گلیکولیزاسون سبب حفظ فعالیت بیولوژیکی پروتئین میشود. وهمین امر احتمال ایجاد اپی توپ های مشابه با سویه ویروس را بالا میبرد. و افزایش تیتر آنتی بادی های ویژه rfsp در سرم موش های ایمن شده را در سطح بالاتری قرار میدهد. لذا اولویت به rfsp بیان شده در سلول CHO برای ارزیابی کارایی واکسن داده میشود.
دوره ۱۷، شماره ۴ - ( ۱۰-۱۳۹۳ )
چکیده
هدف: CtxB با تحریک تولید آنتیبادی علیه CtxB منجر به اثر بخشی واکسن شده است تلاشهای مختلفی در راستای افزایش تولید این آنتیبادی صورت پذیرفته شده است. کایتوسان پلیساکاریدی است که میتواند به مخاط بچسبد؛ این ماده با توجه به ویژگیهای منحصر به فرد از جمله زیستسازگاری، زیستتخریبپذیری، چگالی بار بالا و غیر سمی، پتانسیل بسیار زیادی برای تحویل واکسن خوراکی دارد.
مواد و روشها: دراین مطالعه از نانوکایتوسان و نانوکپسول بهعنوان یک سیستم حامل برای ارایه خوراکی CTXB استفاده شد. نانوکایتوسان حاوی آنتیژن توسط الکترواسپینینگ محلول کایتوسان / AcOH آماده شد. آنتیژن در داخل نانوالیاف کایتوسان از طریق تجزیه و تحلیل طیفسنجی مادون قرمز تأیید شد. خوکچههای هندی توسط تلقیح مستقیم نانوالیاف کایتوسان حاوی آنتیژن به داخل حفره دهانی ایمن شدند. پاسخهای ایمونوگلوبولین سرمG (IgG) و ایمونوگلوبولین رودهای A (IgA) آنتیبادی تعیین شد.
نتایج: خوکچههای هندی بهوسیله کایتوسان همراه با آنتیژن یا آنتیژن به تنهایی ایمن شدند. نتایج بهدست آمده نشانگر پاسخ بسیار زیاد آنتیژن همراه نانوفیبر و نانوکپسول بود. آنتیبادی IgA و IgG پس از تجویز خوراکی CtxB تولید نشد. نتایج آنتیبادی تولید شده با استفاده ازآزمون ANOVA و LSD تجزیه و تحلیل شد.
نتیجهگیری: نتایج این تحقیق نشان دهنده آن است که در روش خوراکی میتوان با نانویی کردن آنتیژن تیتر آنتیبادی را بالا برد. این سیستم میتواند برای انتقال دیگر آنتیژنها استفاده شود.
دوره ۲۰، شماره ۳ - ( ۸-۱۳۹۶ )
چکیده
هدف: عامل کلونیزاسیون پیلی tcpAو توکسین کلرا مهمترین عوامل بیماریزایی ویبریو کلرا هستند و توانایی تحریک سیستم ایمنی را دارند. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی، بیان پروتئین کایمر نوترکیب CTXB-TCPA در باکتری اشریشیا کلی و تولید آنتیبادی علیه آن در موش بود.
مواد و روشها: کاست ژنی دربردارنده ژنهای ctxB، tcpAو فاصلهانداز با روش بیوانفورماتیکی طراحی شد. شاخصههایی از قبیل ساختار پروتئین کایمر و اپی توپها بررسی شد. برای ساخت کاست ژنی، ژنهای ctxBو tcpAتکثیر و در ناقل pET۲۸a همسانهسازی شدند. بیان ژنهای ctxB-tcpAدر pET۲۸a(+) تحت القای IPTG انجام شد. پروتئین نوترکیب CTXB-TCPA به روش SDS-PAGE و لکهگذاری وسترن تأیید شد. تیتر آنتیبادی تولید شده در سرم موش با روش الایزا بررسی شد.
نتایج: شاخص انطباقپذیری در ژن بهینهسازی شده به ۹/۰ تغییر کرد. با بهینهسازی ژنی درصد کدونهای با ترجیح بالا به ۷۴ درصد افزایش یافت. تحلیل آنزیمی همسانهسازی کایمر ژنی ctxB-tcpA در ناقل بیانی pET۲۸a(+) را تأیید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی ۳۵ کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده شد. واکنش پروتئین با آنتیبادی ضد سم کلرا در وسترن بلات تأیید شد. میزان پروتئین خالص شده ۱/۳۳ میلیگرم در لیتر بود. ایمنسازی موشها پاسخ آنتیبادی سرمی را القا کرد.
نتیجهگیری:پروتئین کایمر میتواند برای بررسیهای ایمنی علیه وبا در نظر گرفته شود.
دوره ۲۱، شماره ۱ - ( بهار ۱۳۹۷ )
چکیده
اهداف: آلودگی محیط زیست و مواجهه با فلزات سمی مانند سرب موجب بیماریهای مزمن و بدخیم میشود و دارای عوارض قابل ملاحظهای شامل سرطانزایی، ایمونوتوکسیسیتی و مسمومیت عصبی است. هدف پژوهش حاضر، مقایسه اثر محافظتی روغن فرار میخک و ویتامین C بر سمیت ناشی از تجمع سرب در تخم بلدرچین بود.
مواد و روشها: پژوهش کارآزمایی بالینی حاضر روی ۳۶۰ قطعه جوجه بلدرچین در سالن پرورش طیور دانشکده دامپزشکی دانشگاه شهرکرد در سال ۱۳۹۵ انجام گرفت. بلدرچینها بهصورت تصادفی به ۶ گروه با جیرههای غذایی مختلف تقسیم شدند. پس از انجام مداخله، در ۴۲روزگی از هر گروه ۵ تخم بلدرچین جمعآوری شد. برای تعیین میزان تجمع بافتی سرب در تخم بلدرچین از دستگاه جذب اتمی استفاده شد و سنجش میزان پراکسیداسیون چربیها با آزمایش ترکیبات واکنشگر تیوباربیتوریکاسید (TBARS) و اندازهگیری مالوندیآلدئید صورت گرفت. دادهها با نرمافزار GraphPad Prism ۵ و از طریق آزمون تحلیل واریانس یکطرفه و آزمون تعقیبی توکی تحلیل شدند.
یافتهها: میانگین تجمع سرب در تخم بلدرچین در گروه دریافتکننده سرب و اسانس میخک به طور معنیداری نسبت به گروه دریافتکننده سرب کمتر بود (۰۵/۰p<)، همچنین میانگین غلظت مالوندیآلدئید در گروه دریافتکننده سرب بهتنهایی بهطور معنیداری بیشتر از دو گروه دریافتکننده سرب بههمراه اسانس میخک یا ویتامین C بود (۰۵/۰p<).
نتیجهگیری: استفاده از اسانس میخک در جیره بلدرچین، اثر محافظتی بیشتری نسبت به ویتامین C، بر سمیت ناشی از تجمع سرب در تخم بلدرچین دارد.
دوره ۲۱، شماره ۲ - ( تابستان ۱۳۹۷ )
چکیده
اهداف: نوروتوکسینهای بوتولینوم، از قویترین سمهای شناختهشده هستند که با مهار آزادسازی میانجی عصبی استیلکولین، موجب ایجاد فلج شل عضلانی میشود. طراحی مهارکنندهها هنوز بهعنوان یک راهبرد اصلی برای مهار درونسلولی مسمومیتهای ناشی از سموم مذکور بهشمار میآید. برای بررسی پتانسیل عملکرد مهارکنندههای طراحیشده، به سم خالص یا ناحیه کاتالیتیک آن نیاز است. هدف مطالعه حاضر، بررسی بیان و تخلیص ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E BoNT/E)) نوترکیب از یک ژن صناعی بود.
مواد و روشها: در مطالعه تجربی حاضر، توالی زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E از بانک ژن بهدست آمد و بهینهسازی کدونی براساس E. coli BL۲۱ انجام شد. سایر بررسیهای بیوانفورماتیک لازم برای بیان بهتر ژن صورت گرفت. توالی ژن برای سنتز و همانندسازی در وکتور pET۲۸a(+) سفارش داده شد. وکتور نوترکیب داخل باکتری E. coli BL۲۱ انتقال و بیان پروتئین با ایزوپروپیلتیو-بتا-دیگالاکتوزیداز (IPTG) القا شد. برای بیان محلول، در شرایط بیانی تغییر صورت گرفت. سپس بهوسیله کروماتوگرافی تمایلی و فیلتر آمیکون پروتئین خالصسازی شد. برای بررسی بیان و خالصسازی پروتئین SDS-PAGE و برای تایید پروتئین بیانشده تکنیک وسترنبلات بهکار رفت.
یافتهها: شاخص سازگاری کدون ژن به ۰/۸۵ افزایش یافت. ساختار سوم پیشبینیشده کیفیت مناسب را نشان داد. ساختار mRNA نشان داد، ساختار پیشبینیشده پایدار بود. بیان محلول پروتئین در شرایط °C۱۸ بهمدت ۱۸ساعت با القای IPTG، یکمیلیمولار بهدست آمد. تولید پروتیئن و با خلوص بالای ۹۰% تایید شد.
نتیجهگیری: بهینهسازی شرایط بیان پروتئین زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E موجب تولید محلول آن در محیط کشت توسط میزبان E. coli BL۲۱ میشود.
دوره ۲۱، شماره ۲ - ( تابستان ۱۳۹۷ )
چکیده
اهداف: سرطان سینه شایعترین سرطان میان زنان در ایران و دنیا است و ۲۲% کل سرطانهای زنان را شامل میشود. حدود ۳۰% موارد سرطانهای سینه بهعلت تکثیر یا بیان بیش از حد پروتئین HER-۲ است. کیتوزان پلیمری سازگار با محیط زیست بوده که بهدلیل حداقل مسمومیت سیستمیک برای تحویل پپتید یا دارو، در برنامههای کاربردی مطرح است. هدف مطالعه حاضر تهیه نانوذرات کیتوزان دربردارنده پروتئین نوترکیب HER-۲، ارزیابی ویژگیها و تاثیر ایمنیزایی خوراکی و تزریقی آن در لنفوسیتهای طحال بود.
مواد و روشها: در مطالعه تجربی حاضر، وکتور pET-۲۸a حاوی ژن نوترکیب HER-۲ با روش PCR و پرایمرهای عمومی تایید شد. بیان پروتئین با ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز (IPTG) القا و با استفاده از ستون رزین کروماتوگرافی نیکل- نیتریلو تریاستیکاسید (Ni-NTA) تخلیص و پروتئین با وسترنبلاتینگ تایید شد. نانوذرات کیتوزان واجد پروتئین نوترکیب به روش ژلاسیون یونی تهیه و اندازه ذرات با DLS و ایمنیزایی نانوذرات در موش و ارزیابی پاسخ لنفوسیتها با تست MTT صورت گرفت. برای تحلیل دادهها از آزمونهای آنالیز واریانس یکطرفه، آزمون دانکن و نرمافزار ۲۲ SPSS استفاده شد.
یافتهها: پروتئین نوترکیب HER-۲ با اندازه مولکولی ۱۸کیلودالتون تایید شد. میزان پروتئین تخلیصشده ۱۲میلیگرم در لیتر بود. ظرفیت بارگذاری پروتئین در نانوذرات، ۷۰% و متوسط اندازه نانوذرات ۲۰۵/۲نانومتر مشاهده شد. ایمنسازی موشها پاسخ ایمنی همورال و مخاطی را القا کرد.
نتیجهگیری: ظرفیت بارگذاری پروتئین HER-۲ در نانوذرات کیتوزان، ۷۰% و متوسط اندازه نانوذرات ۲۰۵/۲نانومتر است و ایمنسازی موشها پاسخ ایمنی همورال و مخاطی را القا و تجویز خوراکی تزریقی بیشترین میزان پاسخ را ایجاد میکند.