جستجو در مقالات منتشر شده
۲ نتیجه برای وسترن بلات
دوره ۱۳، شماره ۲ - ( ۷-۱۳۸۹ )
چکیده
هدف: کریپتوسپوریدیوزیس یک بیماری انگلی است که توسط تک یاختهای کوچک از جنس کریپتوسپوریدیوم ایجاد میشود. انتقال عفونت بهصورت مدفوعی- دهانی، از طریق تماس مستقیم یا غیرمستقیم و از طریق مواد غذایی یا نوشیدنی است. هدف از این مطالعه، بررسی ایمونوگلوبولین IgG ضد کریپتوسپوریدیوم پارووم در نوزادان موش BALB/c آلوده شده است.
مواد و روش‌ها: اووسیستها از نمونههای مدفوع اسهالی گوسالههای جوان جمعآوری و خالص شده در محلول نگاهدارنده دی کرومات ۵/۲ درصد و در یخچال ۴ درجه نگهداری شدند. ۴۰ نوزاد موش (۳-۴ روزه) BALB/c در هشت گروه پنج تایی شامل چهار گروه نمونه و چهار گروه کنترل استفاده شد و سپس ۱۰۵×۵ اووسیست به گروههای نمونه، از راه دهانی به کمک لوله گاواژ تلقیح شد. از قلب موشهای گروههای نمونه و کنترل روزهای ۶، ۹، ۱۲، ۱۶ بعد از تزریق خونگیری و سرمها در شرایط استریل ذخیره شد. ایمونوگلوبولینها به روش رسوبدهی نمک استخراج و برای تأیید وجود ایمونوگلوبولینها از روش SDS-PAGE استفاده شد.
نتایج: آنتیبادیهای بهدست آمده توسط روش وسترن بلات تجزیه و تحلیل شد. افزایش ترشح آنتیبادی در
نوزادان موش آلوده به اووسیست کریپتوسپوریدیوم پارووم، از نوع IgG تأیید شد و میزان میانگین جذب نوری آن از ۰۹۹/۰ ± ۳۵/۰ در روز ۶ بعد از تزریق به میزان ۰۹۹/۰ ± ۶۷۷۶/۰ افزایش یافت؛ در حالیکه میزان جذب نوری گروههای کنترل در روز ششم ۰۱۶/۰ ± ۲۴۴/۰ بود و در روز ۱۶ فقط به ۰۱۶/۰ ± ۳۲۲/۰ افزایش یافته بود و این افزایش در گروههای مورد، نسبت به گروههای کنترل از نظر آماری تفاوت معنیداری را نشان داد (۰۵/۰>P).
نتیجهگیری: آنتیبادی بررسی شده در این مطالعه در نوزادان موش آلوده به اووسیست کریپتوسپوریدیوم از نوع IgG بود که علیه غشای خارجی اووسیست ترشح میشود و اختلاف معنیداری در نوزادان موش گروه مورد نسبت به گروه کنترل مشاهده شد.
پوران بدیری، مجید صادقی زاده، بیژن بمبئ، سیده زهرا بطحائی، مهرناز بحرینی، زرین مینوچهر،
دوره ۱۵، شماره ۴ - ( ۷-۱۴۰۳ )
چکیده
مقدمه: پپتید آمیلوئید بتا (Aβ) علت اصلی تشکیل پلاگ‌های سمی در بیماران آلزایمری می‌باشد. به‌همین علت، مطالعه بر روی این پپتید و شناخت مکانیسم‌های مولکولی و سلولی مرتبط آن، در تشخیص و درمان بیماری ضروری است. پژوهش حاضر یک روش سریع، آسان و ارزان برای تولید و خالص‌سازی این پپتید ارائه داده که بر اساس بیان ژن Aβدر سیستم باکتریایی است.
مواد و روش‌ها: ژن Aβسنتز و به وکتور بیانی pET۲۶b انتقال یافت. پس‌از القا با لاکتوز و انکوباسیون ۲۴ساعته جهت بیان پپتید، رسوب سلولی حاصل به منظور بررسی و تایید وجود پپتید نوترکیب بوسیله SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی گردید. سپس خالص‌سازی پپتید نوترکیب با روش کروماتوگرافی تمایلی ستون Ni-NTA صورت گرفت. تعیین ویژگی کشندگی سلولی Aβخالص، در غلظت های µM ۲۵ و µM ۵۰ با استفاده از آزمون MTT بر روی لاین سلولی مدل آلزایمر(SH-SY۵Y) انجام شد.
نتایج: نتایج PCR Colony و تعیین‌توالی تاییدکننده ورود صحیح قطعه بیان‌کننده Aβبه داخل وکتور بیانی می باشد. بررسی طول باندها در SDS PAGE و وسترن بلات، نمایانگر بیان موفقیت‌آمیز پپتید نوترکیب حاوی دنباله هیستیدینی می‌باشد. در نهایت نتیجه آزمون MTT نشان داد که پپتید خالص‌شده در غلظت‌های µM۲۵ و µM۵۰ به‌ترتیب دارای کشندگی ۳۰ و ۵۰ درصدی است.
بحث: تولید پپتید آمیلوئید بتا در میزبان‌های باکتریایی بسیار مطلوب به‌نظر می‌رسد. همچنین به‌دست‌آوردن پپتید Aβخالص به صورت محلول یک مزیت مهم این تحقیق می‌باشد. با توجه به عملکرد کشندگی پپتید خالص‌شده، میتوان از آن برای تیمار سلول‌های مدل و انجام مطالعات پیرامون آلزایمر استفاده نمود.
