جستجو در مقالات منتشر شده
۳ نتیجه برای Vhh
سیده شیرین شاهنگیان، شیرین جلیلی، عمار محسنی، رضا حسن ساجدی، صادق حسن نیا، مجید تقدیر، محمد محمدی، ریحانه سریری،
دوره ۵، شماره ۱ - ( ۳-۱۳۹۳ )
چکیده
با توجه به اهمیت مهار VEGF و ویژگی های بی نظیر VHH که آنها را در زمره نسل جدید داروهای از نوع آنتی بادی قرار داده ، هدف از این مطالعه تولید VHH علیه دمین متصل شونده به رسپتور VEGF است تا بدین ترتیب از اتصال VEGF به رسپتورش ممانعت بعمل آید. پس از تهیه گنجینه ژنی قطعات VHH از شتر ایمن، کتابخانه نمایش فاژی VHH ساخته شد. برای جداسازی فاژهای نمایشگرVHH با تمایل بالا به دمین متصل شونده به رسپتور VEGF، غنی سازی های متوالی سختگیرانه ای انجام گرفت. ۵۲ درصد از کلون های اختصاصی غربال شده توسط الایزای فاژ مونوکلونال توالی یکسانی داشتند که حاکی از غنی شدن بالای این کلون بود. ساختار سه بعدی این VHH VEvhh۱)) مدل‌سازی شده و با استفاده از شبیه سازی میانکنش بین مولکولی آنتی ژن-آنتی بادی براساس اطلاعات کریستالوگرافی کمپلکس VEGF/VEGFR۲، شبیه سازی دینامیک مولکولی و محاسبات انرژی آزاد MM/PBSA ، تصویر موثقی از جایگاه اتصال VHH بر روی آنتی ژن ارائه گردید. براساس نتایج مطالعات، VHH با انرژی اتصال بالایی به جایگاه اتصال به رسپتور VEGF متصل شده و بطور مؤثری این آمینواسیدهای کلیدی عملکردی VEGF را پوشش داده، مانع اتصال VEGF به رسپتور آن می گردد و احتمالا فعالیت بیولوژیک آن را مختل می سازد. این مطالعه VEvhh۱ را بعنوان کاندید مناسب ضد VEGF و ضد آنژیوژنز معرفی می کند.
دوره ۱۰، شماره ۰ - ( ۵-۱۳۸۶ )
چکیده
هدف: قطعه متصل شونده به آنتی ژن از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری به صورت یک تک دومن(VHH )می باشند. ساختار کریستالی یک VHH خالص نشان داده است که این مولکول در حدود۵/۲ نانومتر قطر و کمتر از ۴ نانومتر طول دارد. به همین علت به این مولکول نانوبادی گفته می شود. شباهت زیاد این مولکولها به VH انسانی موجب می شود که این مولکول کاربرد بالقوه در تشخیصهای ایمنی و نیز ایمنی درمانی داشته باشد. یکی از مواد مورد نیاز کلیدی در تولید و تعیین خصوصیات نانوبادی ونیز کاربرد نانوبادیها در تشخیص، مولکول آنتی نانوبادی کونژوگه به HRP می باشد.
مواد و روشها: در این تحقیق بیان بالا و تخلیص چند نانوبادی ویژه تومورمارکرها انجام شد. به منظور بیان بالا، ژنهای نانوبادی در وکتور pSJF۹ ساب کلون شدند، که در نتیجه قطعه نانوبادی به صورت ادغام شده با چند دنباله نشانگر در باکتری E coliنوعTG۱ بیان می شود. نانوبادیهای بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شدند. در اینجا تهیه، تخلیص و تعیین خصوصیات آنتی بادی علیه نانوبادیها که به صورت متصل به HRPمیباشد، توضیح داده شده است.
نتیجه: آنالیز با SDS-PAGE و وسترن بلات نشان می دهد که نانوبادیهای تخلیص شده خالص و بدون شکستگی می باشد. بعلت استفاده از روشهای خاص بیوشیمی آنتی بادی کونژوگه به HRP تولید شده در این تحقیق، حساسیت و ویژگی مناسبی دارد. آنتی بادی کونژوگه تولید شده قابل استفاده در سیستمهای تشخیص نانوبادی است.
بحث:در اینجا با تنظیم کردن دما و زمان و القا کننده، میزان قابل توجهی (در مقایسه با مطالعات مشابه) از ملکول نو ترکیب بیان وسپس تخلیص شده است و در فاز دوم با تولید آنتی بادی علیه آن و کونژوگاسیون به مولکول آنزیمی نشان دادیم مولکول حاصل قابلیت تشخیص نانوبادیها را در انواع روشهای تشخیصی با دقت و حساسیت بالا دارد.
سلیم الحفیان، زینب رضایی، سیده‌شیرین شاهنگیان، رضا حسن ساجدی،
دوره ۱۴، شماره ۲ - ( ۳-۱۴۰۲ )
چکیده
آنژیوژنز در بسیاری از فرآیندهای فیزیولوژیک و پاتولوژیک از جمله رشد تومور دخالت دارد و VEGF مهمترین فاکتور در این فرایند محسوب میشود. امروزه تولید آنتیبادی های تک دمینی (VHH) با ویژگی مهار فاکتورهای رشد در تومورهای سرطانی یکی از راهکارهای جدید درمان سرطان میباشد. در پژوهش قبلی ما مشخص شد VHHهای شتری تهیه شده با استفاده از نمایش فاژی علیه VEGF در مهار آن نقش اساسی ایفا میکند. در این بین VHHی که دارای بیشترین تمایل به جایگاه اتصال به VEGF در بین دیگر اعضا کتابخانه فاژیVHH ها تهیه شده بود، انتخاب شد. با توجه به کارایی بیان سطحی E. coli با استفاده از موتیف لنگری پروتئین هسته‌زایی یخ (INP)، از این سیستم برای بیان پروتئین استفاده شد. از آنجا که در اتصال INP به سطح سلول فقط دمین انتهای آمینی نقش دارد، در طراحی سازه ژنی از ۵۳۷ جفت باز ابتدایی ژن InaK استفاده شد. همچنین با قراردادن جایگاه برش آنزیم پروتئاز TEV بین INP وVEvhh۱۰، امکان جداسازی موفقیت آمیز VEvhh۱۰ از سطح سلول باکتری فراهم گردید. بیان سطحی با استفاده از پلاسمید pET-۲۱a حاوی INP و VEvhh۱۰علیه VEGF انجام شد. نتایج نشان داد دنباله INPگزینه مناسبی برای بیان سطحی VEvhh۱۰در E. coli میباشد. پس از تولیدVEvhh۱۰ نوترکیب، جداسازی و تخلیص با استفاده از سانتریفیوژ و شستشوی متعدد انجام گرفته و اتصال آن به VEGF مورد بررسی قرار گرفت. اتصال موفقیتآمیزVEvhh۱۰ به VEGF نشان داد که پروتئین نوترکیب حاصل میتواند برای کاربردهای درمانی و تشخیص بالینی بیماران در آینده مورد استفاده قرار گیرد.
