جستجو در:
دوره 12، شماره 1 - ( 1399 )
جلد 12 شماره 1 صفحات 118-103 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Ghadiri H, Alavi S, Dabirmanesh B, Khajeh K. Recombinant expression of C-terminal domain of Rif1 and its solubilization with sarkosyl. JMBS 2020; 12 (1) :103-118
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-39101-fa.html
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-39101-fa.html
غدیری حامد، علوی ثنا، دبیرمنش بهاره، خواجه خسرو. بیان نوترکیب بخش C-ترمینال پروتئین Rif1 و محلول سازی آن با سارکوزیل. زیست‌فناوری مدرس. 1399; 12 (1) :103-118
حامد غدیری1 
، ثنا علوی2 ، بهاره دبیرمنش1 ، خسرو خواجه* 3
، ثنا علوی2 ، بهاره دبیرمنش1 ، خسرو خواجه* 3
1- بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2- بخش نانوبیوتکنولوژی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3- بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران، بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران ، khajeh@modares.ac.ir
2- بخش نانوبیوتکنولوژی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3- بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران، بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران ، khajeh@modares.ac.ir
چکیده: (1017 مشاهده)
ژنوم یوکاریوتی حاوی چندین محل شروع همانندسازی می¬باشد. بررسی¬ها نشان می¬دهد که روند و ترتیب فعال شدن این منشأها با نظم خاصی صورت می¬گیرد که این فرآیند منظم را اصطلاحاَ زمانبندی همانندسازی (Replication timing) می-گویند. مطالعات اخیر نشان می¬دهد که فاکتورهای زیادی در تنظیم زمانبندی فرآیند همانندسازی نقش دارند. یکی از مهمترین این فاکتورها پروتئین متصل¬شونده به Rap1 (Rif1)، می¬باشد که نقش اساسی را در تنظیم برنامه زمانبندی همانندسازی در مخمر و یوکاریوت¬های پیشرفته¬تر ایفا می¬کند. قسمت عمده ساختار این پروتئین به صورت نامنظم بوده و این ویژگی¬ها مانع از بیان Rif1 به صورت پایدار شده و مطالعه بر روی آن را دشوار می¬کند.
هدف از مطالعه کنونی بیان نوترکیب دمین C-ترمینال پروتئین Rif1 موشی (muRif1-CTD) به صورت محلول می¬باشد. بدین منظور ژن muRif1-CTD از سازه یوکاریوتی حاوی ژن کامل Rif1 به کمک PCR استخراج و در وکتور بیانی pPAL7 که حاوی برچسب Profinity eXact بود، قرار گرفت. محلول¬سازی پروتئین با استفاده از دترجنت¬های مختلف و در مرحله بعد حذف دترجنت با استفاده از دیالیز صورت پذیرفت. به منظور اطمینان از اینکه پروتئین محلول شده دارای فعالیت است آنالیز برهمکنش پروتئین Rif1 با ساختار G4 (که قبلا در رابطه با اتصال به Rif1 معرفی شده بود) با روش ژل شیفت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این بررسی نشان داد که استفاده از دترجنت می¬تواند برای محلول سازی پروتئین Rif1 بدون اثرگذاری بر مراحل خالص¬سازی آن مورد استفاده قرار گیرد. لیکن در مورد این پروتئین در صورت فقدان کامل دترجنت، این پروتئین به صورت محلول نخواهد بود.
هدف از مطالعه کنونی بیان نوترکیب دمین C-ترمینال پروتئین Rif1 موشی (muRif1-CTD) به صورت محلول می¬باشد. بدین منظور ژن muRif1-CTD از سازه یوکاریوتی حاوی ژن کامل Rif1 به کمک PCR استخراج و در وکتور بیانی pPAL7 که حاوی برچسب Profinity eXact بود، قرار گرفت. محلول¬سازی پروتئین با استفاده از دترجنت¬های مختلف و در مرحله بعد حذف دترجنت با استفاده از دیالیز صورت پذیرفت. به منظور اطمینان از اینکه پروتئین محلول شده دارای فعالیت است آنالیز برهمکنش پروتئین Rif1 با ساختار G4 (که قبلا در رابطه با اتصال به Rif1 معرفی شده بود) با روش ژل شیفت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این بررسی نشان داد که استفاده از دترجنت می¬تواند برای محلول سازی پروتئین Rif1 بدون اثرگذاری بر مراحل خالص¬سازی آن مورد استفاده قرار گیرد. لیکن در مورد این پروتئین در صورت فقدان کامل دترجنت، این پروتئین به صورت محلول نخواهد بود.
واژه‌های کلیدی: پروتئین Rif1، سارکوزیل، محلول سازی، زمانبندی همانندسازی، بیان در سیستم‌های پروکاریوتی
نوع مقاله: پژوهشی اصیل |
موضوع مقاله:
بیوتکنولوژی مولکولی
دریافت: 1398/9/26 | پذیرش: 1398/10/18 | انتشار: 1399/10/10
دریافت: 1398/9/26 | پذیرش: 1398/10/18 | انتشار: 1399/10/10
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |