دوره 11، شماره 3 - ( 1399 )                   جلد 11 شماره 3 صفحات 58-50 | برگشت به فهرست نسخه ها

‎ 20.1001.1.23222115.1399.11.3.3.6

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Ghasemi ّ, Zomorodipour A, Karkhane A A, Khorramizadeh M. Production of a novel hyper-glycosylated human coagulation factor IX in HEK293 cells, using a Glyco-engineering Approach. JMBS 2020; 11 (3) :50-58
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-32209-fa.html
قاسمی فهیمه، زمردی پور علیرضا، کارخانه علی اصغر، خرمی زاده محمدرضا. تولید فاکتور 9 انعقادی انسانی هایپرگلیکوزیله در سلول‌های جنینی کلیه انسان (HEK293) با رویکرد مهندسی گلیکوزیلاسیون. زیست‌فناوری مدرس. 1399; 11 (3) :50-58

URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-32209-fa.html

تولید فاکتور 9 انعقادی انسانی هایپرگلیکوزیله در سلول‌های جنینی کلیه انسان (HEK293) با رویکرد مهندسی گلیکوزیلاسیون
فهیمه قاسمی1 ، علیرضا زمردی پور* 2، علی اصغر کارخانه3 ، محمدرضا خرمی زاده4
1- گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بیرجند، بیرجند، ایرانمرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی بیرجند، بیرجند، ایران،
2- گروه پزشکی مولکولی، پژوهشکده بیوتکنولوژی پزشکی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری ، zomorodi@nigeb.ac.ir
3- پژوهشکده بیوتکنولوژی محیطی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری،
4- مرکزتحقیقات بیوسنسور،پژوهشگاه علوم غدد و متابولیسم، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده فناوریهای نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران،
چکیده:   (4650 مشاهده)
هایپرگلیکوزیلاسیون فرایندی است که در آن با استفاده از روشهای مهندسی ژنتیک و جهش ­زایی هدفمند یک جایگاه جدید N-گلیکوزیلاسیون (موتیف Asn-Xxx-Ser/Thr) به درون توالی اسیدآمینه ­ای پروتئین نوترکیب وارد می­ شود. در صورت اتصال گلیکن جدید به آسپاراژین موجود در این موتیف، هایپرگلیکوزیلاسیون رخ می­ دهد. این فرایند بویژه در صنعت تولید پروتئین­های دارویی بسیار مورد توجه است. ویژگی­های فارماکوکینتیکی داروهای نوترکیب، ممکن است تحت تاثیر گلیکن اضافه شده قرار ­گرفته و نیمه عمر آنها افزایش یابد. در این تحقیق، بر اساس مطالعات بیوانفورماتیکی، در دامنه گلای فاکتور 9 انسانی یک جایگاه جدید N-گلیکوزیلاسیون از طریق جهش­ زایی هدفمند مبتنی بر PCR و تبدیل کدون اسیدآمینه آرژینین شماره 37 به آسپاراژین ایجاد شد. توالی رمز کنندۀ فرم جهش یافته فاکتور 9  انسانی بطور موازی با توالی طبیعی (به عنوان کنترل)، در وکتور بیانی pCEP4 مجهز به پروموتر ویروس سایتومگالو (CMV)، همسانه سازی شده و بیان آنها در سلول­های HEK293 مورد بررسی قرار گرفت. به منظور بررسی رخداد هایپرگلیکوزیلاسیون در نوع جهش یافته، از روش گرادیان SDS-PAGE دارای شیب غلظت آکریل­آمید و به دنبال آن وسترن بلاتینگ استفاده شد که نشان دهنده سنگین­تر بودن محصول جهش یافته نسبت به فرم طبیعی بود. همچنین پس از هضم با استفاده از آنزیم PNGase هر دو محصول طبیعی و جهش یافته وزن مولکولی یکسانی کسب کردند. این نتایج نشان داد که افزایش وزن مولکولی پروتئین جهش یافته ناشی از اضافه شدن گلیکن جدید بوده و تایید کننده رخداد هایپرگلیکوزیلاسیون است.
 
واژه‌های کلیدی: فاکتور 9 انعقادی انسانی نوترکیب، هایپرگلیکوزیلاسیون، سلولهای HEK293.
متن کامل [PDF 886 kb]   (2515 دریافت)    
نوع مقاله: پژوهشی اصیل | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی دارویی
دریافت: 1398/2/2 | پذیرش: 1399/5/21 | انتشار: 1399/7/11
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.