دوره 3، شماره 2 - ( 1391 )                   جلد 3 شماره 2 صفحات 12-1 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Ebrahimi F. The Recombinant Expression and Purification of Botulinum Neurotoxin type A Catalytic Domain in E. coli, from a synthetic gene. JMBS 2012; 3 (2) :1-12
URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-7933-fa.html
ابراهیمی فیروز، فراست علیرضا، موسوی سید جعفر، حسینخانی سامان، حاجی زاده عباس، نظریان شهرام. بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.‌coli از یک ژن مصنوعی. زیست‌فناوری مدرس. 1391; 3 (2) :1-12

URL: http://biot.modares.ac.ir/article-22-7933-fa.html

بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.‌coli از یک ژن مصنوعی
فیروز ابراهیمی1 ، علیرضا فراست2، سید جعفر موسوی3، سامان حسینخانی4، عباس حاجی زاده5، شهرام نظریان5
1- عضو هیات علمی دانشگاه امام (حسین)، تهران
2- دانشجوی کارشناسی ارشد، تهران
3- عضو هیئت علمی،
4- عضو هیئت علمی، تهران
5- عضو علمی گروه، تهران
چکیده:   (11232 مشاهده)
نوروتوکسین‌های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته­­ شده‌اند که باعث ایجاد فلج عضلانی می­شوند. خاصیت آنزیمی این توکسین‌ها، مهار آزاد­سازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث می­شود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ A با درصد خلوص بالا، به‌منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام‌شد.  توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A از پایگاه ژنی NCBI گرفته‌شد. پس از بهینه‌سازی کدون ترجیحی ژن مورد‌ نظر برای E.­coli، توالی نهایی ژن به‌منظور سنتز در وکتور بیانی pET28a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان E.­coli BL21-DE3 ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون Ni-NTA تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت 5/0 میلی مولار IPTG، با جذب نوری 5/0 و زمان القای 18 ساعت در دمای 18 درجه سانتی گراد به‌دست آمد. آزمایش‌های وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تأیید‌کردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوری‌که پروتئین مورد نظر با درصد خلوص 98 به‌دست آمد.
واژه‌های کلیدی: نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A، زنجیره سبک، ناحیه کاتالیتیک، بیان نوترکیب
متن کامل [PDF 208 kb]   (6113 دریافت)    
نوع مقاله: مقاله استخراج شده از پایان نامه | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی
دریافت: 1390/7/25 | پذیرش: 1391/6/20 | انتشار: 1391/12/20
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.