نوروتوکسینهای بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته شدهاند که باعث ایجاد فلج عضلانی میشوند. خاصیت آنزیمی این توکسینها، مهار آزادسازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث میشود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ A با درصد خلوص بالا، بهمنظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجامشد. توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A از پایگاه ژنی NCBI گرفتهشد. پس از بهینهسازی کدون ترجیحی ژن مورد نظر برای E.coli، توالی نهایی ژن بهمنظور سنتز در وکتور بیانی pET28a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان E.coli BL21-DE3 ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون Ni-NTA تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت 5/0 میلی مولار IPTG، با جذب نوری 5/0 و زمان القای 18 ساعت در دمای 18 درجه سانتی گراد بهدست آمد. آزمایشهای وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تأییدکردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوریکه پروتئین مورد نظر با درصد خلوص 98 بهدست آمد.
ابراهیمی,فیروز , فراست,علیرضا , موسوی,سید جعفر , حسینخانی,سامان , حاجی زاده,عباس و نظریان,شهرام . (1391). بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.coli از یک ژن مصنوعی. زیست فناوری, 3(2), 1-12.
MLA
ابراهیمی,فیروز , , فراست,علیرضا , , موسوی,سید جعفر , , حسینخانی,سامان , , حاجی زاده,عباس , و نظریان,شهرام . "بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.coli از یک ژن مصنوعی", زیست فناوری, 3, 2, 1391, 1-12.
HARVARD
ابراهیمی فیروز, فراست علیرضا, موسوی سید جعفر, حسینخانی سامان, حاجی زاده عباس, نظریان شهرام. (1391). 'بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.coli از یک ژن مصنوعی', زیست فناوری, 3(2), pp. 1-12.
CHICAGO
فیروز ابراهیمی, علیرضا فراست, سید جعفر موسوی, سامان حسینخانی, عباس حاجی زاده و شهرام نظریان, "بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.coli از یک ژن مصنوعی," زیست فناوری, 3 2 (1391): 1-12,
VANCOUVER
ابراهیمی فیروز, فراست علیرضا, موسوی سید جعفر, حسینخانی سامان, حاجی زاده عباس, نظریان شهرام. بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپA در E.coli از یک ژن مصنوعی. زیست فناوری, 1391; 3(2): 1-12.
